茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析

• 作者: 史成颖 宛晓春 徐乾 李正国 李海婧 汤之近 邓威威
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 茶树 谷氨酰胺 茶氨酸 基因克隆 原核表达 酵母表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 40-47
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786|Q789
• 字数: 6414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2017.01.0040

摘要

在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1).结果显示:(1)GS1-2基因全长为1710 bp,开放阅读框长1071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3 kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%.(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5 x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白.(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史成颖	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	16	206	7.0	14.0
2	邓威威	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	25	104	6.0	9.0
3	李正国	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
4	徐乾	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	3	7	2.0	2.0
5	李海婧	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
6	汤之近	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	4	1.0	1.0