建兰花叶病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 崔波 张燕 梁芳 王若斓 程喜梅 许申平
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 建兰花叶病毒 实时荧光定量PCR 外壳蛋白基因 病毒检测
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 572-580
• 页数: 9页
• 分类号: Q949.71+8.43
• 字数: 5076字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2017074

摘要

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是引起兰科植物病毒病的最重要病原体.研究根据NCBI上已登录的CyMV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因保守区设计两对特异性引物,用RT-PCR法从感病蝴蝶兰中克隆到2条CyMV CP基因序列,编码区ORF长672 bp,编码223个氨基酸.序列分析表明这两个分离物之间有13个核苷酸差异,与已报道的其他地区CyMV分离物CP基因核苷酸相似性分别为97%~99%和97%~98%,氨基酸相似性分别为95%~99%和96%~100%.运用实时荧光定量RT-qPCR法对该病毒检测方法进行了一系列条件优化,建立起一套基于SYBR Green I的CyMV实时荧光定量PCR检测体系.该检测方法比普通RT-PCR法灵敏度高100倍,标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998.重复性试验表明组内及组间变异系数均在2.58%以内,表明该方法重复性较好,可为兰花CyMV的早期预警及病毒在植物体内侵染途径研究提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔波	郑州师范学院生物工程研究所	93	393	10.0	13.0
2	许申平	郑州师范学院生物工程研究所	26	67	5.0	7.0
3	张燕	郑州师范学院生物工程研究所	18	24	3.0	4.0
4	梁芳	郑州师范学院生物工程研究所	36	129	7.0	9.0
5	程喜梅		5	16	2.0	4.0
6	王若斓	郑州大学生命科学学院	3	11	2.0	3.0