实时荧光定量PCR检测柞蚕微孢子虫的方法

• 作者: 冀万杰 孙永欣 朱有敏 李亚洁 李佩佩 李青峰 王凤成 王旭达 王鹤 米锐 范琦 赵振军
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 柞蚕微孢子虫 SYBR Green荧光定量PCR 小亚单位核糖体RNA
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 260-267
• 页数: 8页
• 分类号: Q959.115+.92|S885.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2017.02.012

摘要

提高柞蚕微孢子虫检测技术的准确性和灵敏度,对控制柞蚕微孢子虫的胚种传染至关重要.以柞蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA(SSUrRNA)基因为靶基因,建立柞蚕微孢子虫的实时荧光定量PCR检测方法.结果显示:该方法能够特异性检测柞蚕微孢子虫基因组DNA,而对柞蚕基因组DNA无扩增产物.依据标准曲线确定荧光定量PCR的Ct值≤35作为检测的敏感度区间,对柞蚕微孢子虫基因组DNA的最低检出限为0.004 6 ng.应用该方法对100粒柞蚕蛹样本进行检测,共检出54个样本呈柞蚕微孢子虫感染阳性,而采用普通显微镜镜检与采用常规PCR方法检测呈阳性的样本数量分别为2个和34个.应用该方法对生产中的柞蚕种茧和雌蛾进行抽样检测,柞蚕微孢子虫感染阳性检出率显著高于用普通显微镜镜检的阳性检出率(P＜0.05).建立的柞蚕微孢子虫实时荧光定量PCR检测方法提高了检测的灵敏度.