从江香猪LPL基因克隆、多态及时序表达图谱构建

• 作者: 史开志 尚以顺 张勇 张雄 白优 陆静 陈祥
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 从江香猪 脂蛋白脂酶(LPL) 克隆 时序表达 限制性长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 599-606
• 页数: 8页
• 分类号: S828
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.04.009

摘要

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)具有调控动物机体脂肪沉积的功能,但在小型地方猪种中LPL基因分子遗传机制研究鲜有报道.为探究LPL基因调控功能,揭示其对从江香猪(Sus scrofa)肉质性状的影响,本研究以从江香猪为实验动物,利用RT-PCR技术克隆从江香猪LPL基因CDS区(GenBankNo.1994531),生物信息学软件预测蛋白理化性质及结构特征,通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术对从江香猪LPL基因第5内含子AfaI位点进行遗传效应分析,运用qRT-PCR技术分析不同月龄阶段从江香猪背最长肌组织中LPL mRNA表达发育规律,并研究其与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量相关性.结果表明,从江香猪LPL基因CDS区全序列长1 437 bp,共编码478个氨基酸,构成具有PLAT/LH2结构域的稳定亲水性蛋白.不同品种猪间氨基酸序列的同源性很高,其中从江香猪与挪威长白猪和陆川猪氨基酸序列的同源性高达99.8％,与贵州白香猪同源性最低,为99.2％.PCR-RFLP分析结果显示,AfaⅠ位点共检测到CC、CG和GG 3种基因型,其中CG为优势基因型,等位基因C和G的频率分别为35.05％和64.95％,从江香猪群体在此位点处于Hardy-Weinberg平衡状态;CC基因型的皮厚显著高于CG型(P＜0.05),但背膘厚、眼肌面积和肌内脂肪含量与其他基因型个体间差异不显著(P＞0.05).时序表达谱显示,不同月龄阶段从江香猪背最长肌组织中LPLmRNA表达水平呈现出先降低后升高的趋势,LPLmRNA表达量与IMF呈显著正相关(P＜0.05).结果表明,LPL基因可作为影响从江香猪脂肪沉积的关键候选基因之一,实验结果可为从江香猪LPL基因结构功能的后续研究提供理论依据.