从江香猪PHKG1和PHKG2基因克隆及其mRNA在组织中表达水平

• 作者: 周迪 孙成娟 张青青 张鸣 杨洋 王圆圆 许厚强 赵焕平 陈伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 从江香猪 PHKG1 PHKG2 克隆 组织表达
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1643-1652
• 页数: 10页
• 分类号: S828|S828.8+9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.10.010

摘要

磷酸化酶激酶γl(phosphorylase kinase gammal,PHKG1)和磷酸化酶激酶γ2(phosphorylase kinase gamma2,PHKG2)基因是糖原代谢途径中的重要基因,具有分解糖原为机体肌肉收缩提供能量以及维持血糖平衡的功能.本研究为了对PHKG1和PHKG2基因的遗传机理进行探究,实验以贵州从江香猪(Sus scrofa)和大白猪为研究对象,利用T-A克隆的方法获取贵州从江香猪和大白猪PHKG1(GenBank:NM_001293144.1)、PHKG2(GenBank:NM_001166317)基因编码区序列,并比较2者CDS区序列差异,利用生物信息学软件预测2个基因的蛋白理化特性和功能等;同时采用实时荧光定量PCR技术分析PHKG1和PHKG2基因在贵州从江香猪和大白猪不同组织中表达差异.结果表明,从江香猪PHKG1基因CDS区全序列长1 167 bp,共编码388个氨基酸,PHKG2基因CDS区全序列长1 221 bp,共编码406个氨基酸,二者均构成具有S TKc结构域的跨膜亲水性非分泌蛋白.对PHKG1和PHKG2蛋白结构预测以及进化树聚类分析表明这2个蛋白具有一定的同源性.并发现PHKG1基因存在4个突变位点,分别为A371G、A525G、T945C和C1050T,但是与大白猪相比存在T945C一处突变,均未引起氨基酸的改变,为同义突变;将从江香猪、大白猪、GenBank猪序列(NM_001166317)、巴马香猪(KJ 186785)PHKG2基因序列分析比较发现,G236A、C431T、A726G、A807G、A816G和A867G为大白猪、从江香猪、巴马香猪共有的突变,从江香猪存在A614G特殊的突变位点,并且引起了第205位谷氨酸变成了丙氨酸.qRT-PCR结果显示,PHKG1基因在2个猪品种中均能检测到表达,在背最长肌中表达量最高,在肺脏中大白猪的表达量显著高于从江香猪(P＜0.05);PHKG2基因在从江香猪和大白猪的脾、肺、大肠、小肠中的相对表达量都较高,而在心和背最长肌中的表达量较低.本研究为PHKG1和PHKG2基因后续真核表达的研究提供了理论依据.