FGF10基因真核表达载体的构建及其在从江香猪不同组织中的表达

• 作者: 徐敏 杨洋 许厚强 陈伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 从江香猪 FGF10基因 真核表达载体 肌内前体脂肪细胞 诱导分化 脂肪沉积
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 471-480
• 页数: 10页
• 分类号: S828
• 字数: 6700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.03.011

摘要

成纤维细胞生长因子10基因(fibroblast growth factor 10,FGF10)属于6个FGFs亚家族中的FGF7亚家族,是特异地表达于白色脂肪组织的唯一FGF,在脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用.本实验旨在研究从江香猪(Susscrofa)肌内前体脂肪细胞中FGF10对脂肪代谢的调控功能,实验采用qRT-PCR的方法检测了从江香猪不同组织中的表达情况,并根据克隆得到的FGF10的CDS区,构建了真核过表达载体pEGFP-C1-FGF10;分离培养从江香猪肌内前体脂肪细胞运用胶原酶消化法分离培养从江香猪肌内前体脂肪细胞,并进行了诱导培养,采用油红O染色法进行鉴定;运用qRT-PCR技术检测FGF10基因在不同诱导阶段的从江香猪肌内前体脂肪细胞中的表达;利用脂质体法将重组质粒EGFP-C1-FGF10瞬时转染从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测过表达FGF10基因后脂肪相关代谢沉积的氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)、脂联素基因(adiponectin,ADIPOQ)、脂肪酸结合蛋白4基因(fatty acid binding protein 4,FABP4)、脂肪酸合成酶基因(fatty acid synthase,FAS)、脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)、激素敏感脂酶基因(hormone sensitive lipase,HSL)、脂蛋白酯酶基因(lipoprotein lipase,LPL)以及乙酰辅酶A羧化酶基因(acetyl-CoA carboxylase,ACC)的表达水平.FGF10基因表达量最低是在背最长肌中,表达量最高是在胃中(P＜0.05),其次是在肾脏和脂肪中;在诱导的早期阶段,FGF10基因表达量逐渐增加,在诱导分化48 h的表达量最高;经双酶切和测序鉴定,成功构建了口EGFP-C 1-FGF10表达载体,且在从江香猪肌内前体脂肪细胞中成功表达;与空白对照相比,ACC、FABP4、FAS、LPL、PPARγ的表达量均增加,ADIPOQ、ATGL和HSL的表达量均减少.FGF10对脂肪的沉积具有一定的调控作用,这种作用可能是通过对相关脂肪代谢基因的调控实现的.本研究为揭示FGF10对脂肪的调控作用提供了基础数据.