烟草NtPLR1基因克隆与表达分析

• 作者: 刘国峰 张剑韵 李冰冰 魏书 黄龙全
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 植物学 维生素B6 烟草 NtPLR1 基因克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 页码范围: 581-588
• 页数: 8页
• 分类号: S572|S718.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.2017.04.003

摘要

维生素B6(VB6)在植物体内参与多种生化反应,对植物生长至关重要,吡哆醛还原酶(PLR)是VB6代谢转换的作用酶,催化吡哆醛(PL)生成吡哆醇(PN),对维持细胞内VB6的动态平衡发挥重要作用,而PLR在植物中鲜有报道.以拟南芥Arabidopsis thaliana吡哆醛还原酶氨基酸序列AtPLR1为模板,在公用数据库通过同源比对获得数条烟草Nicotiana tabacum NtPLR1基因的片段,结合互补脱氧核糖核酸(cDNA)的末端快速扩增-聚合酶链式反应(RACE-PCR)技术获得了烟草吡哆醛还原酶NtPLR1基因.该基因全长1370 bp,编码369个氨基酸残基,预测其编码蛋白的分子量为41 kDa,理论等电点为9.42.氨基酸多序列比对结果表明:NtPLR1与其他物种的PLR1相似性较高.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果表明:外源吡哆醛PL处理时,NtPLR1表达先升高后降低,在4 d达到顶峰.相应地,高效液相色谱分析结果表明:烟草叶片中PL含量随时间逐渐降低而吡哆醇PN含量逐渐升高,表明NtPLR1可像酵母PLR一样,催化PL形成PN.此外,定量分析结果表明:NtPLR1在烟草根、 茎和叶片中均有表达,其中在叶片中表达显著高于其他部位(P<0.05).在紫外线、 氧化和盐害胁迫下,NtPLR1的表达与对照相比均显著上调(P<0.05),表明NtPLR1对这3种逆境有响应,可能参与烟草的抗逆过程.将NtPLR1连入原核表达载体pET32a,并进行诱导表达,成功表达出目的蛋白.报道的烟草NtPLR1基因功能为进一步探明植物PLR基因的功能和调控机制以及VB6的生物合成提供了重要参考.图8表1参25

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张剑韵	安徽农业大学外国语学院	36	305	11.0	16.0
2	黄龙全	安徽农业大学茶与食品科技学院	37	305	11.0	16.0
3	魏书	安徽农业大学茶与食品科技学院	6	8	2.0	2.0
4	李冰冰	安徽农业大学茶与食品科技学院	1	0	0.0	0.0
5	刘国峰	安徽农业大学茶与食品科技学院	1	0	0.0	0.0