利用rBE3和rBE4系统进行水稻基因单碱基编辑的特异性和遗传稳定性分析

• 作者: 严芳 任斌 周焕斌 张大伟 旷永洁 李娜 林宏辉
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: CRISPR/Cas9n 大鼠胞苷脱氨酶 脱靶效率 T-DNA分离 水稻
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1776-1785
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.170172

摘要

对基于rBE3 (Rice base editor)和rBE4碱基编辑系统创制获得OsSERK1(D428N)和pi-ta(S918F)等基因的单碱基编辑突变体材料进行编辑特异性和遗传稳定性分析,旨在全面了解和更好地利用该碱基编辑系统.首先对OsSERK1 (D428N)和pi-ta(S918F) sgRNA的潜在脱靶位点进行预测,并对T0代材料中的各脱靶位点进行PCR扩增和Sanger测序检测;同时对该两个基因的突变体材料自交获得的T1代植株的靶位点序列和外源T-DNA分离进行检测.结果显示各T0代材料均未检测到潜在脱靶位点发生单碱基编辑;此外,OsSERK1(D428N)和Os08g07774含有相同的sgRNA位点,且两个位点均能发生单碱基编辑;rBE3或rBE4系统介导产生的碱基编辑可稳定遗传至T1代,并在T1代可获得无外源T-DNA的纯合突变体.上述结果表明由rBE3或rBE4介导的碱基编辑具有较高的特异性,可进行多位点编辑,引入的碱基替换可稳定遗传至后代.