蓝舌病病毒核酸标准样品的制备及荧光定量RT-PCR方法的研究

• 作者: 乔彩霞 任彤 尹羿 张伟 汪琳 蒲静 高志强
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蓝舌病病毒 NS3基因 标准样品 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 799-803
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4441字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0425.201509045

摘要

为制备蓝舌病病毒(BTV)NS3基因标准样品并建立BTV通用型荧光定量RT-PCR检测方法,本研究首先从BTV-1型核酸中扩增完整的NS3基因,经克隆测序后,采用体外转录方法制备其cRNA.使用RNA保存液稀释至含量约108拷贝/μL,分装后进行均匀度和稳定性检验,并通过联合定值确定标准样品的量值.结果表明,BTV NS3标准样品的瓶间差异＜5％,均匀度和稳定性良好;定值结果为(1.032±0.02)×108拷贝/μL.此外,使用该BTV标准样品作为模板,通过优化反应体系和条件,建立了BTV通用型荧光定量RT-PCR快速检测方法,并评价其特异性和敏感性.结果显示,该方法能够对目前流行的26个血清型的BTV核酸检测均为阳性,而与其它相关的反刍动物病毒均无交叉反应,特异性良好,且最低可检测到10拷贝/μL病毒核酸.采用建立的BTV荧光定量RT-PCR方法对送检的临床样品进行检测,并与国家标准规定的套式RT-PCR方法进行比较,结果表明两种方法一致性很高,但荧光定量RT-PCR方法操作更为简便,结果准确,更适用于大量临床样品的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒲静	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	34	111	6.0	8.0
2	张伟	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	48	119	7.0	8.0
3	高志强	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	48	143	7.0	9.0
4	乔彩霞	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	27	128	7.0	9.0
5	汪琳	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	49	252	8.0	14.0
6	尹羿	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	15	30	4.0	4.0
7	任彤	北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心	16	26	3.0	4.0