皮革鞣制过程中产生大量有害物质,对环境造成了严重污染.角蛋白酶是一类水解角蛋白的酶,是皮革鞣制中理想的鞣制剂替代品.为了发掘角蛋白酶重要的基因资源,试验从土壤中克隆KerA基因,构建了原核表达载体pET-22b-KerA,通过热激法转入BL21(DE3)中进行表达并在表达时间上进行了优化,对表达的产物进行Western-blot鉴定,通过Ni2+ Sepharose Fast Flow分离纯化了KerA,并通过水解角蛋白验证其活性.结果表明:克隆的KerA基因可以在原核中表达,并具有水解角蛋白的活性.说明基因工程重组手段生产KerA具有可行性.