金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR方法的建立与初步应用

• 作者: 刘健敏 尤红煜 张东明 栗彦宁 梁晓亮 王俊霞 王璇 祝岩波 连伟光 郑龙
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 绿脓杆菌 肺炎克雷伯杆菌 多重PCR
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 94-98
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.020

摘要

目的 建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法,为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌LasI基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因和细菌通用16S rRNA基因设计出特异性引物;经过多重PCR引物浓度和退火温度的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系.应用该PCR体系对人工感染标本、实验动物粪便样本进行验证检测,与传统检测方法对比.结果 多重PCR分别扩增出金黄色葡萄球菌(153 bp)、绿脓杆菌(600 bp)、肺炎克雷伯杆菌(368 bp)和通用(520 bp)的目的条带.多重敏感性为10 pg,特异性检测未从其他细菌中检测出目的条带.应用建立的多重PCR体系检测出不同组合的人工感染标本,从76只粪便检测出绿脓杆菌阳性1例,与传统检测方法结果一致.结论 本文建立的多重PCR方法具有特异、灵敏、简便、快速等优点,为实验动物微生物的快速检测提供了可靠的方法.