NPM1K263SUMO化位点在PEDV N蛋白与NPM1共定位中的作用

• 作者: 冯力 季朝阳 张鑫 时洪艳 王潇博 石达 陈建飞
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 核衣壳蛋白 核仁蛋白NPM1 定点突变
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 940-942
• 页数: 3页
• 分类号: S852.65
• 字数: 1930字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201701030

摘要

为阐明细胞核仁蛋白NPM1与猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)共定位的关键位点.本实验通过设计突变引物,利用重叠延伸PCR方法对NPM1氨基酸位点T199、K230和K263进行定点突变,分别将其克隆至真核表达载体pDsRed2-N1中,获得重组质粒pDsRed2-NPM1 (T199A)、pDsRed2-NPM1 (K230R)、pDsRed2-NPM1 (K263R).随后分别将pDsRed2-NPM1 (WT)、pDsRed2-NPM1 (T199A)、pDsRed2-NPM1 (K230R)、pDsRed2-NPM1 (K263R)与重组质粒pAcGFP-N共转染Vero E6细胞.共聚焦结果显示NPM1 (T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均与N蛋白共定位于细胞的核仁中.虽然NPM1 (K263R)与N蛋白具有共定位现象,但两者共定位于细胞核中.该实验结果为进一步研究核仁蛋白NPM1参与PEDV复制的分子机制奠定了基础.