基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析

• 作者: 刘立明 周义发 曹婷婷 朱羿龙 李昌 杜寿文 王茂鹏 田宇飞 白杰英 许汪 赵翠青 赵飞 邢彬 金宁一
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 干扰素诱导跨膜蛋白3 干扰素刺激基因 诱导表达 病毒进入 抑制
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 页码范围: 770-777
• 页数: 8页
• 分类号: O629.7|Q786|Q291
• 字数: 4729字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7503/cjcu20160794

摘要

利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3, 并将其与调控质粒 pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK), 转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选, 用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定, 并进行Dox敏感性分析、 IFITM3+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶 (Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验, 检测萤光素酶活性.结果表明, 筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系, 且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5 μg/mL, 诱导12 h时IFITM3+细胞数达75%以上, 且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明, IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5, H7和VSV G蛋白介导的病毒进入, 为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.