CRISPR/Cas9系统介导敲除CSN2基因奶山羊胎儿成纤维突变细胞的制备

• 作者: 张勇 张欢 申培磊 贾启鹏
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 奶山羊 CRISPR/Cas9系统 敲除 β-酪蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 131-138
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0218

摘要

旨在研究 β-酪蛋白(β-casein,CSN2)对奶山羊泌乳性能的影响,利用CRISPR/Cas9系统敲除奶山羊胎儿成纤维细胞(GFFs)CSN2基因,为转基因动物模型构建提供核供体.针对CSN2第二号、八号外显子设计5个靶向CSN2基因sgRNA(T1、T2、T3、E1和E2),与PX330-eGFP载体连接,构建PX330-eGFP-sgRNA敲除表达载体,经T7E I酶切实验评估敲除效率;选择第八号外显子敲除效率最高sgRNA,构建PX330-Neo-sgRNA敲除载体,将PX330-eGFP-sgRNA T及PX330-eGFP-sgRNA E与PX330-Neo-sgRNA E组合转染细胞,经流式分选、G418药筛获得敲除CSN2基因细胞.Western blot测定转染细胞CSN2表达情况.测序结果表明各sgRNA均正确连入PX330表达载体中,T7E 1酶切实验表明sgRNA T1、sgRNA E2敲除效率最高达34.9%和25.9%;经荧光定量PCR及免疫荧光检测结果表明,eGFP+Neo转染组CSN2敲除细胞比例显著高于eGFP+eGFP转染组(P<0.05).综上表明,CRISPR/Cas9系统可有效应用于奶山羊胎儿成纤维细胞基因编辑,产生的突变细胞为制备CSN2基因敲除奶山羊提供核供体材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张勇	甘肃农业大学动物医学院	147	410	9.0	11.0
5	张欢	甘肃农业大学动物医学院	6	5	1.0	1.0
6	贾启鹏	甘肃农业大学动物医学院	3	2	1.0	1.0
7	申培磊	甘肃农业大学生命科学技术学院	3	3	1.0	1.0