乙酰乳酸合成酶基因(budB)整合表达载体的构建

• 作者: 孙雯 宋刚 平文祥 葛菁萍 邓利廷
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 2,3-丁二醇 乙酰乳酸合成酶 产酸克雷伯氏菌 电转化法 酶活力
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 25-30
• 页数: 6页
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

为了进一步了解2,3-丁二醇合成路径中关键酶的表达量与产量之间的关系,本研究根据GenBank中乙酰乳酸合成酶基因(budB)的基因序列设计引物,以产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到目标酶基因,目的片段全长1680bp.以表达载体pRSFDuet-1为骨架,利用基因工程手段构建整合表达载体pRlSW-budB.电转化法将其转化至菌株HD79感受态细胞中,通过高浓度Kan筛选和PCR双重鉴定验证后测定ALS酶活力.结果表明,乙酰乳酸合成酶基因整合表达载体构建成功,酶活可达1.0627U/mg,比原始菌株提高了4.35倍.在一定程度上为实现2,3-丁二醇的工业化生产奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	平文祥	微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院	23	133	6.0	10.0
2	葛菁萍	微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院	28	191	7.0	12.0
3	宋刚	微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院	9	63	5.0	7.0
4	邓利廷	微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	孙雯	微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0