scFv-RBP4融合蛋白的构建

• 作者: 刘崇东 娄彤 张震宇 曹广明 李红侠
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: RBP4 融合蛋白 scFv HEK293T 构建
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1082-1085
• 页数: 4页
• 分类号: R714.2
• 字数: 3443字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建scFv-RBP4融合蛋白.方法 采用德泰生物最新开发的密码子优化软件MaxCodonTM Optimization Program (V13)对提供的scFv-RBP4蛋白氨基酸序列进行优化,设计全长拼接引物,通过双酶切法将scFvRBP4基因插入到表达载体proEM中,并通过酶切法和测序确认最终表达载体的准确性,最终转到DH5a克隆菌株中,通过质粒大抽试剂盒提取转染级质粒,之后将质粒通过转染试剂转染到哺乳动物细胞HEK293T中进行瞬时表达,再通过Ni-IDA亲和层析纯化scFv-RBP4蛋白.结果 酶切和测序结果显示,scFv-RBP4蛋白构建正确,目标蛋白纯度＞90％.结论 构建的scFv-RBP4融合蛋白可以在HEK293T细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘崇东	首都医科大学附属北京朝阳医院妇产科	45	272	9.0	15.0
2	张震宇	首都医科大学附属北京朝阳医院妇产科	135	1107	18.0	26.0
3	娄彤	首都医科大学附属北京朝阳医院妇产科	6	3	1.0	1.0
4	李红侠	民航总医院妇产科	3	0	0.0	0.0
5	曹广明	首都医科大学附属北京朝阳医院妇产科	2	0	0.0	0.0