融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3的构建及其靶向性观察

• 作者: 卢杨 孔凡妮 张益枝 张砚君 杨圆圆 查剑英
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: anti-CD19(Fab)蛋白 融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3 B淋巴细胞瘤
• 年，卷（期）: 2017,（23）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 39-42
• 页数: 4页
• 分类号: R318|R733
• 字数: 3290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2017.23.011

摘要

目的 构建针对CD19的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3,并观察其靶向性.方法 采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZY-anti-CD19(Fab)-CH3,测序鉴定后,转化至大肠杆菌16C9,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,采用SDS-PAGE电泳Western blotting法鉴定纯化蛋白,用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)检测纯化后蛋白中二聚体的比例.采用流式细胞术检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)与CD19+的B系淋巴瘤Raji细胞的结合力,采用竞争免疫荧光结合实验检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)作用下亲代鼠源性抗体HIT19a和Raji细胞的结合力.结果 SDS-PAGE电泳和Western blotting法均观察到相对分子质量约65 kDa的蛋白条带,与融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3的分子量相符.纯化后蛋白中二聚体比例约为89%.与anti-CD19(Fab)相比,相同浓度的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3与Raji细胞的结合能力较高.融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3作用下HIT19a-FITC与Raji 细胞的结合荧光强度低于等浓度的anti-CD19(Fab)作用下HIT19a-FITC与Raji 细胞的结合荧光强度.结论 成功构建并表达融合蛋白 anti-CD19(Fab)-CH3.与单体anti-CD19(Fab)相比,融合蛋白anti-CD19 (Fab)-CH3与CD19+的B淋巴瘤细胞Raji的靶向性较好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张砚君	中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所	5	2	1.0	1.0
2	孔凡妮	中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所	2	1	1.0	1.0
3	查剑英	中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所	2	1	1.0	1.0
4	杨圆圆	中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所	3	1	1.0	1.0
5	卢杨	中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所	3	1	1.0	1.0
6	张益枝		3	15	2.0	3.0