血栓调节蛋白内皮生长因子样结构域和富含丝氨酸/苏氨酸结构域在大肠埃希菌中的表达

• 作者: 周罗成 王宁 王尧 王晓 王海嵘
• 来源期刊: 内科理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 血栓调节蛋白 绿色荧光蛋白 融合蛋白 大肠埃希菌
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 358-363
• 页数: 6页
• 分类号: R446.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.16138/j.1673-6087.2018.06.007

摘要

目的:通过构建血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)的内皮生长因子样结构域(D2)、富含丝氨酸/苏氨酸结构域(D3)及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大肠埃希菌表达体系,以获得TM-D23-GFP融合蛋白.方法:从美国国家生物技术信息中心查询TM的D23结构域、GFP的氨基酸序列,进行密码子优化和全基因合成,利用双酶切法将目标基因插入表达载体PET30a中,转化DE3菌株、诱导表达,通过镍离子-亚胺二乙酸-琼脂糖凝胶树脂(Ni-iminodicitic acid-sefinose resin,Ni-IDA)亲和层析、Q SepharoseTM FF离子交换层析纯化,最终得到TM-D23-GFP融合蛋白.结果:经酶切和测序鉴定证实,TM-D23片段已正确插入PET30a表达载体中;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测结果证实,含His-tag标签的TM-D23-GFP融合蛋白成功表达,且其相对分子质量约为60 000.结论:构建的TM-D23-GFP融合蛋白可在DE3表达菌株中进行表达,为后期融合蛋白的功能研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宁		113	669	13.0	24.0
2	王海嵘		66	232	9.0	12.0
3	王尧		12	11	2.0	3.0
4	王晓		16	44	3.0	6.0
5	周罗成		8	7	1.0	2.0