烟草ISSR-PCR反应体系优化的初实验

• 作者: 何江 崔明勇 彭欣怡 杨祥燕 王东贤 王卫峰 王新钧 覃剑峰 覃旭 陈涛 黄显雅
• 来源期刊: 农业研究与应用
• 关键词: 烟草 ISSR-PCR 优化体系
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 字数: 2237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0764.2018.03.004

摘要

为了探索建立烟草的ISSR-PCR最适反应体系,用单因素设计方法对影响ISSR-PCR反应体系的主要影响因素进行优化筛选.结果表明,烟草的最适反应体系为:反应总体积为20μL:2.00μL10×buffer,50ng(1μL)模板DNA,Taq聚合酶的用量为4U(0.8μL),0.6μmol/L(1.2μL)引物,0.75 mmol/L(0.6μL)Mg2+,0.3 mmol/L(2.4μL)dNTP,dd H2O12μL,退火温度为52℃.用筛选的引物对36份烟草种质分别进行PCR扩增,扩增条带清晰,清晰度和多态性都较好,可以认为该反应体系对烟草种质具有较好的可靠性和稳定性.