利用epiCRISPR载体表达双sgRNA实现高效的HDAC基因编辑

• 作者: 李苗苗 王子实 王永明
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 epiCRISPR 双gRNA 组蛋白去乙酰化酶 纯合敲除致死基因
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 页码范围: 412-421
• 页数: 10页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文

摘要

CRISPR/Cas9技术是广泛使用的一种基因编辑技术,它包括Cas9和gRNA 2个元件.具有内切酶活性的Cas9能够通过gRNA识别并切断目标DNA序列.细胞主要通过非同源末端连接途径修复DNA,这是一个容易产生indel的修复途径,理论上有近2/3概率产生移码突变,可以用于基因敲除.很多癌缅胞系和体外培养的细胞系基因拷贝数增加了,同时敲除所有拷贝的难度增大,因此有必要开发一种高效的基因敲除方法.本实验室在前期工作中利用附着体载体表达的Cas9和gRNA,可以高效地产生indel,称为epiCRISPR系统.在本研究中,我们用epiCRISPR系统同时表达2个gRNA,可以在目标基因上删除一段DNA序列,其长度不是3的倍数,这样可以高效地产生移码突变.HDAC(histone deacetylase)基因家族编码一类负责组蛋白去乙酰化的蛋白酶,对细胞生长有重要影响,敲除难度较大.我们利用附着体载体表达双gRNA的技术成功地得到了HDAC1、HDAC2和HDAC6纯合敲除细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王子实	复旦大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
2	李苗苗	复旦大学生命科学学院	5	3	1.0	1.0
3	王永明	复旦大学生命科学学院	3	10	1.0	3.0