赤松ISSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 娄虹 孟靖 安娜 赵曼琳 邢晓琳
• 来源期刊: 辽宁大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: ISSR-PCR 赤松 正交设计 体系优化
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生命与环境科学
• 页码范围: 281-288
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 字数: 5121字
• 语种: 中文

摘要

为了建立赤松ISSR-PCR反应体系,利用正交试验分别对影响赤松PCR反应的dNTP浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度、引物浓度、模板浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定引物的最佳退火温度和循环次数.最终确定赤松ISSR-PCR最佳反应体系及扩增条件为:25 μL反应体系中含2.5 μL 10 ×PCR Buffer、3mmol·L-1dNTP、1.5 mmol·L-Mg2+、0.5 UTaq酶、0.3μmol·L-引物、9 ng模板;扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行94℃变性30 s,55℃退火45 s(退火温度随引物不同而变化),72℃延伸2min,35个循环,最后72℃延伸7 min.这一ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR技术对赤松进行物种分类鉴定奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	娄虹	辽宁大学生命科学院	26	234	10.0	14.0
2	孟靖	辽宁大学生命科学院	6	1	1.0	1.0
3	赵曼琳	辽宁大学生命科学院	2	1	1.0	1.0
4	邢晓琳	辽宁大学生命科学院	3	1	1.0	1.0
5	安娜	辽宁大学生命科学院	2	1	1.0	1.0