基于CPB细胞扩增体系的鳜弹状病毒增殖条件的优化

• 作者: 付小哲 张悠 李宁求 林强 罗霞 黄志斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鳜弹状病毒 鳜脑细胞 接毒方法 增殖条件 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 页码范围: 1481-1488
• 页数: 8页
• 分类号: S941.4
• 字数: 4660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20170610857

摘要

为获知鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)QY株在体外培养细胞中最适增殖条件,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cell line,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术所测病毒拷贝数为判断指标,比较同步接毒和异步接毒2种接种方式以及病毒接种量、血清浓度等培养条件对病毒增殖的影响,确定SCRV-QY株在CPB细胞中的最适增殖条件.结果显示,单位体积病毒增殖量方面,异步接毒法优于同步接毒法,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10将病毒接种长满单层的CPB细胞中,28°C吸附1.5 h,用含2％胎牛血清的L15培养液于28°C培养时,病毒增殖量最高,为5.59×1010拷贝/mL;而从单位成本所获病毒量考虑,同步接毒法筛选出的4种增殖条件单位成本所获的病毒产量优于异步接毒法,其中当MOI=0.03、胎牛血清终浓度为6％时,同步接种对数生长中期的CPB细胞,28°C恒温培养70 h后收获病毒液,单位成本所获病毒量最高,为4.88×1013个拷贝/元.综上所述,本研究以病毒增殖量和培养基成本作为考量,优化SCRV-QY株的增殖条件,可为SCRV疫苗低成本、规模化生产提供理论依据.