狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制

• 作者: 刘文俊 张博越 张琼 张莹 梅明珠 罗均 罗永文 赵静 郭霄峰 阳佑天
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 G蛋白 IFN-β通路 β干扰素 病毒滴度
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 页码范围: 10-17
• 页数: 8页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2018.06.003

摘要

[目的]探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础.[方法]通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β 以及相关因子转录的影响.[结果]Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β 基因的表达,36 h达到最高水平(P<0.001).该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致.抗体阻断IFN-β 后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P<0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异.与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β 的转录(P<0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β 的转录.[结论]本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用.RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β 通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖.G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用.