副猪嗜血杆菌荧光定量PCR方法的建立及初步应用

• 作者: 冉晓龙 崔沛 王东方 王淑娟 班付国 闫若潜
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 荧光定量PCR 建立
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 101-105
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2018.09.025

摘要

为建立一种快速、敏感、特异的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法,根据GenBank登录的HPS 16S rRNA基因序列,设计1对特异性引物和1条特异性TaqMan-MGB探针,建立了HPS荧光定量PCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性以及重复性和稳定性进行了验证.结果显示:本研究建立的HPS FQ-PCR方法在101～106拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系,所得相关系数为0.998;检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;特异性好,对pGEM-T/HPS重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对4个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/HPS重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好.对30份临床疑似HPS感染的组织样品进行应用检测,检出19份阳性,比商品化的HPS FQ-PCR检测试剂盒及常规PCR方法的阳性检出率高.结果表明,本研究建立的HPS FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的优点,可用于临床HPS感染猪的早期检测,对HPS的快速诊断、综合防控具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫若潜		94	467	12.0	17.0
2	王东方		14	51	5.0	6.0
3	王淑娟		22	57	4.0	6.0
4	班付国		32	20	3.0	3.0
5	冉晓龙		14	6	1.0	2.0
6	崔沛		15	19	3.0	3.0