肠道病毒71型免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 吴晓卫 张利 朱欢 王乐 翟建新 钟文杨
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 核酸 肠道病毒71型 荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 63-66,70
• 页数: 5页
• 分类号: R512.5|TD687
• 语种: 中文
• DOI: 10.13217/j.scjpm.2018.0063

摘要

目的 建立肠道病毒71型(EV 71型)免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法.方法 根据EV 71型VP1基因保守序列设计高特异性、高保守性的引物和探针,运用设计序列和缓冲液建立一种免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法,并与传统RT-PCR方法进行比较.结果 本研究建立的方法能够检测出EV 71型病毒株和EV 71型核酸标准品,而对柯萨奇病毒A4、A6、A10、A24型和诺如病毒、肠道腺病毒、札如病毒、麻疹病毒、风疹病毒的扩增均为阴性,阴性对照结果中无非特异性扩增和无假阳性结果.灵敏度检测结果显示,对EV 71型核酸标准品最低检测浓度为6.13 × 102copies/μL,灵敏度标准曲线为y=-3.329 8x+ 41.571(r=0.999 4).对临床样本检测结果显示,本研究方法与传统RT-PCR检测方法检测结果的Kappa值为0.82,一致性强度等级为最强.结论 本研究建立的EV 71型免提取核酸荧光RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,适用于EV 71型的临床样本筛选分析.