嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析

• 作者: 吴京 吴振 曾小群 潘道东 熊蓉露 王文文 郭宇星
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜酸乳杆菌 分选酶A 基因克隆 酶学特性 结构特性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 76-81
• 页数: 6页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 5823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201804012

摘要

分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用.为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体pET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Trans etta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性.结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20 kDa左右;Mg2+、Zn2+、Mn2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性.进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8 条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205.