几丁质酶基因的克隆表达及酶学性质

• 作者: 叶秀云 朱凡 林娟 梁燕辉 郑家敏
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 几丁质酶 弧菌 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能
• 页码范围: 1027-1034
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170571

摘要

[背景]几丁质是自然界中储藏量仅次于纤维素的有机物,几丁质酶能降解几丁质生成几丁寡糖,实现废弃物的高值化利用,目前菌株产几丁质酶能力低限制了它的生产应用.[目的]克隆弧菌(Vibrio sp.) GR52的几丁质酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,对分离纯化的重组几丁质酶进行酶学性质研究.[方法]以弧菌GR52菌株基因组DNA为模板,克隆得到几丁质酶基因GR52-1,构建重组基因工程菌BL21 (DE3)/pET22b-chiGR5 2-1,诱导表达的产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究.[结果]重组酶的最适反应pH为6.0,在pH5.0-10.0范围内37℃保温1h仍能保持85％以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性;最适反应温度为50℃,在45℃保温1h其酶活力基本没有损失,在50℃保温1h其残余酶活力仍达60％;在1 mmol/L浓度下,Cu2+、Ca2+对该酶具有促进作用,Hg+对该酶具有明显的抑制作用;在5 mmol/L浓度下,Ni+对该酶具有一定的促进作用,Mn2+、Co2+、Li+、Fe2+、Hg+、SDS(十二烷基硫酸钠)对该酶具有明显的抑制作用.以胶体几丁质为底物时,动力学参数Km、Vmax、kcat分别为0.85 mg/mL、0.19 μmol/(mL·min)和7.02s-1.底物特异性分析表明该重组酶能特异性降解几丁质.[结论]重组几丁质酶具有良好的酶学性质,为几丁质酶的开发应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶秀云		13	77	6.0	8.0
2	林娟		11	78	6.0	8.0
3	梁燕辉		2	14	2.0	2.0
4	朱凡		2	14	2.0	2.0
5	郑家敏		1	4	1.0	1.0