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慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立
慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立
作者:
吴大洲
周欢栋
张浩川
李仲荣
沈德雷
郑娜
陈肖鸣
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
微RNAs
内胚层窦瘤
慢病毒载体
细胞增殖
摘要:
目的 构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响.方法 根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接.转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定.293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度.将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1.用Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响.结果 构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P<0.05).CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05).结论 成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖.
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转染
慢病毒属
Nfe2l2
成纤维细胞
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稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立
人血栓调节蛋白
CHO细胞
稳定转染
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文献信息
篇名
慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立
来源期刊
中华小儿外科杂志
学科
关键词
微RNAs
内胚层窦瘤
慢病毒载体
细胞增殖
年,卷(期)
2018,(11)
所属期刊栏目
实验研究
研究方向
页码范围
867-871
页数
5页
分类号
字数
4494字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.11.014
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
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1
陈肖鸣
温州医科大学附属第一医院小儿外科
25
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2
吴大洲
温州医科大学附属第一医院小儿外科
3
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3
周欢栋
温州医科大学附属第一医院小儿外科
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沈德雷
温州医科大学附属第一医院小儿外科
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郑娜
温州医科大学附属第一医院小儿外科
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研究来源
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研究去脉
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期刊影响力
中华小儿外科杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0253-3006
CN:
42-1158/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市胜利街155号
邮发代号:
38-19
创刊时间:
1980
语种:
chi
出版文献量(篇)
8600
总下载数(次)
20
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