慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立

• 作者: 吴大洲 周欢栋 张浩川 李仲荣 沈德雷 郑娜 陈肖鸣
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 微RNAs 内胚层窦瘤 慢病毒载体 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 867-871
• 页数: 5页
• 字数: 4494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.11.014

摘要

目的 构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响.方法 根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接.转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定.293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度.将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1.用Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响.结果 构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P＜0.05).CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈肖鸣	温州医科大学附属第一医院小儿外科	25	73	5.0	8.0
2	吴大洲	温州医科大学附属第一医院小儿外科	3	1	1.0	1.0
3	周欢栋	温州医科大学附属第一医院小儿外科	2	1	1.0	1.0
4	沈德雷	温州医科大学附属第一医院小儿外科	2	0	0.0	0.0
5	郑娜	温州医科大学附属第一医院小儿外科	2	0	0.0	0.0