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摘要:
目的 构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响.方法 根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接.转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定.293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度.将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1.用Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响.结果 构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P<0.05).CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05).结论 成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖.
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文献信息
篇名 慢病毒介导的稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株的建立
来源期刊 中华小儿外科杂志 学科
关键词 微RNAs 内胚层窦瘤 慢病毒载体 细胞增殖
年,卷(期) 2018,(11) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 867-871
页数 5页 分类号
字数 4494字 语种 中文
DOI 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.11.014
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 陈肖鸣 温州医科大学附属第一医院小儿外科 25 73 5.0 8.0
2 吴大洲 温州医科大学附属第一医院小儿外科 3 1 1.0 1.0
3 周欢栋 温州医科大学附属第一医院小儿外科 2 1 1.0 1.0
4 沈德雷 温州医科大学附属第一医院小儿外科 2 0 0.0 0.0
5 郑娜 温州医科大学附属第一医院小儿外科 2 0 0.0 0.0
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研究主题发展历程
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微RNAs
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慢病毒载体
细胞增殖
研究起点
研究来源
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研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华小儿外科杂志
月刊
0253-3006
42-1158/R
大16开
武汉市胜利街155号
38-19
1980
chi
出版文献量(篇)
8600
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20
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