慢病毒载体介导下DJ-1过表达细胞模型的建立

• 作者: 任静 李毅 杨慧 鲁玲玲
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 帕金森病 DJ-1 PC12细胞 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 2927字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人野生型DJ-1及其L166P突变体的慢病毒载体并探讨慢病毒载体在构建基因过表达细胞模型中的作用.方法 分别构建野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1慢病毒载体质粒.进行测序确定比对正确后,进行质粒的大量扩增与制备并转染包装细胞系HEK293T细胞,荧光法和Western blot检测野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1在细胞系中的表达.在确定目的蛋白正确表达之后,大量转染HEK293T细胞进行包装并生产携带目的基因的慢病毒颗粒.测定病毒上清滴度后感染PC12细胞,荧光显微镜和Western blot观察GFP荧光强度以及目的蛋白的表达,确定病毒的感染效率.结果 成功构建携带DJ-1野生型及其突变体的慢病毒载体.该病毒载体可以转染进入HEK293T细胞内且目的蛋白能够正确表达.LV-DJ-1与LV-DJ-1/L166P的病毒滴度分别为2×109 TU/mL与2×108 TU/mL.病毒上清可以高效感染PC12细胞,绝大多数细胞可表达目的蛋白.外源野生型DJ-1和L166P突变体的蛋白表达量分别是内源性含量的315%和285%.结论 慢病毒感染细胞效率很高,是很好的制备基因过表达细胞的方法.通过慢病毒载体介导,本研究获得了DJ-1及其突变体的过表达细胞模型.该模型可以用于后续DJ-1功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧	首都医科大学基础医学院神经生物学系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所教育部神经变性病重点实验室	124	633	13.0	17.0
2	李毅	首都医科大学基础医学院神经生物学系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所教育部神经变性病重点实验室	13	40	4.0	5.0
3	鲁玲玲	首都医科大学基础医学院神经生物学系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所教育部神经变性病重点实验室	8	20	2.0	4.0
4	任静	首都医科大学基础医学院神经生物学系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所教育部神经变性病重点实验室	16	31	4.0	4.0