基于CRISPR/Cas9技术构建BHV-1gE缺失株及其免疫生物学特性初步鉴定

• 作者: 刘春羽 刘海瑞 张金玲 李光鹏 杨洋 温永俊 穆艳霞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1) CRISPR/Cas9 同源重组 糖蛋白E基因(gE)
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 2003-2016
• 页数: 14页
• 分类号: S-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.12.001

摘要

牛(Bos taurus)疱疹病毒I型(Bovine herpes virus type I,BHV-1)可引发牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR),对养牛业造成巨大经济损失.基因缺失疫苗的广泛使用可有效减少BHV-1感染.为了更高效地构建基因缺失疫苗,本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑与同源重组技术,构建带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记并缺失糖蛋白E基因(glycoprotein E,gE)的重组BHV-1病毒,命名为BHV-1 gE-/EGFP+.随后通过特异性的小向导RNA (smallguide RNA,sgRNA)敲除BHV-1 gE-/EGFP+病毒基因组中的EGFP基因,该gE基因缺失株命名为BHV-1ΔgE.体外生物学特性分析显示,BHV-1 AgE与亲本BHV-1具有相似的生长特性和噬斑形态.动物免疫实验结果显示,gE基因缺失没有改变BHV-1的免疫原性,BHV-1 gE缺失株可作为新型重组IBR疫苗的候选毒株.本研究首次利用CRISPR/Cas9系统对BHV-1 gE基因进行了缺失编辑,提供了一种高效的BHV-1基因缺失毒株的构建方法,为IBR基因缺失疫苗研制提供了实验依据.