基于CRISPR/Cas9技术快速构建PRV gE基因缺失病毒

• 作者: 乌冬高娃 刘春羽 孙雨茗 张洪亮 张赫 李伊铭 杭天宇 温永俊 王凤雪 赵洪哲 金铭
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒 变异毒株 糖蛋白E基因 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 87-93
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.05.017

摘要

为快速、高效构建伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白E基因(gE)缺失病毒,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先将pSpCas9(BB)-2A-GFP荧光质粒转染至VERO细胞和PK-15细胞,选出转染效率较高的细胞系,同时于http://crispr.mit.edu/网站设计并合成3个高评分的小导向RNA(small guide RNA,sgRNA),通过噬斑形成试验,筛选出高效sgRNA.其次将筛选出的针对PRV gE基因的sgRNA转染于PK-15细胞,然后接种PRV-1病毒,经过5轮噬斑克隆纯化获得PRV-1-ΔgE.结果显示:VERO细胞比PK-15细胞具有更好的转染效果;gE-sgRNA1和gE-sgRNA2可作为针对gE基因的高效sgRNA;获得了1株PRV gE基因缺失291 bp的病毒,将其命名为PRV-1-ΔgE.研究表明,CRISPR/Cas9基因编辑技术可作为一种高效编辑PRV-1 缺失病毒基因的方法,同时也为后续快速应对PRV 变异株研究提供了新思路.