利用CRISPR/CAS9技术构建QKI敲除GC1-spg细胞株及其生物学功能检测

• 作者: 宋伟 李凯 杨阳 王琳芳 缪时英 钟顺顺
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/CAS9 GC1-spg QKI 精子发生
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 589-593
• 页数: 5页
• 分类号: R334
• 字数: 2512字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响.方法 利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)和基因测序鉴定出GC1-spg敲除QKI细胞株;常规培养野生型和敲除细胞株,利用细胞计数检测试剂盒(CCK8)绘制增殖曲线和荧光定量PCR(q-PCR)检测减数分裂相关基因变化.结果 本研究成功构建出QKI敲除GC1-spg细胞株,与对照组相比,QKI敲除细胞株的增殖明显下降(P<0.05),减数分裂相关分子标志基因c-kit、Mtl5和Hspa2表达量明显降低(P<0.05).结论 QKI蛋白可以影响GC1-spg的增殖和分化,因此QKI蛋白可能通过影响增殖和分化而影响精子发生.