miR-582-5p通过调控Wnt通路影响胃癌AGS细胞的增殖和耐药

• 作者: 刘思达 刘斌 刘栋 孙学军 张涛 普彦淞 李晓帆 武敏 段降龙 毛智军 王建华 薛飞 高增战 龙延滨
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌 miR-582-5p LGR5 细胞增殖 细胞周期 奥沙利铂 耐药性
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 470-476
• 页数: 7页
• 分类号: R735.2
• 字数: 4632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2018.05.004

摘要

目的 观察microRNA-582-5p(miR-582-5p)对人胃癌细胞AGS增殖和耐药功能的影响,探讨其分子机制.方法 miR-582-5p mimics通过脂质体转染人胃癌AGS细胞(实验组),同时设置阴性对照组(转染Negative Control)和空白对照组(untreated cell).实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞技术分别检测转染3组细胞后miR-582-5p的表达变化、增殖能力、药物敏感性、细胞周期;Target Scan Human网站预测LGR5基因可能是miR-582-5p的靶基因之一,并用双荧光素酶报告载体验证其靶基因;Western blot检测3组细胞中cyclinD1、c-myc、survivin和LGR5蛋白的表达.结果 相比阴性对照组和空白对照组,实验组中AGS细胞增殖能力下降,在第72,96小时生长速度明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05).相比阴性对照组和空白对照组,实验组细胞周期被抑制,G0/G1期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05),细胞对奥沙利铂的敏感性增强,耐药性降低(P<0.05).相比阴性对照组和空白对照组,实验组含有LGR5基因的3′UTR荧光素酶活性明显得到抑制,而且Wnt通路下游靶基因cyclinD1、c-myc、survivin和LGR5蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照组和空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-582-5p在胃癌细胞中可作为抑癌因子调控胃癌细胞增殖能力、化疗药物奥沙利铂耐药性、细胞周期变化,并通过下调LGR5调控Wnt信号通路,推测miR-582-5p和胃癌的发生和发展有关.