低毒性金葡萄球菌肠毒素A D227A突变体的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 刘雪婷 张建国 曾丽萍 谢洋 邹泽红 陶爱林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SEA D227A突变 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 882-886,891
• 页数: 6页
• 分类号: R392.8
• 字数: 4402字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.06.016

摘要

目的:获得低毒性但仍保留其免疫活性、高纯度的重组D227A突变型金葡菌肠毒素A蛋白(rSEAD227A).方法:利用PCR技术克隆含D227A突变的SEA基因并原核表达,用盐酸胍溶解包涵体并进行梯度透析复性;使用StrepⅡ亲和层析来纯化蛋白;免疫印迹和LC-MS/MS进行鉴定.结果:成功克隆SEA的D227A突变体,获得了高纯度的rSEAD227A蛋白. LC-MS/MS分析证实,胰酶消化后的rSEAD227A肽段序列与数据库中SEA的序列匹配.结论:获得了高纯度rSEAD227A蛋白,为SEA的进一步基础研究和临床应用提供了实验基础.