点突变SEA(D227A)的基因构建、原核表达与鉴定

• 作者: 叶菁 张秀敏 曹云新 李增山 陈广生 隋延仿
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 点突变
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 521-524
• 页数: 4页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3260字
• 语种: 中文

摘要

目的:进行点突变的SEA(D227A)基因原核表达载体的构建,并进行表达、分离纯化与鉴定.方法:采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使得到的SEA基因752位碱基突变由A突变为C,致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由D(GAT)突变为A(GCT),构建pRSET-SEA(D227A)重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行原核表达,再通过Westem blot进行鉴定.结果:构建的SEA(S227A)基因经测序证实与设计的序列一致.成功地构建pRSET-SEA(D227A)重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过IPTG诱导得到分子量约为32kD的蛋白,Western blot显示其能够与抗SEA的单克隆抗体特异性结合,最后采用Ni2+-NTA柱进行分离纯化.结论:成功地构建SEA(D227A)基因原核表达载体,并在大肠杆菌中得到高效表达,为寻找有效低毒副作用的超抗原提供了线索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹云新	第四军医大学免疫学教研室	108	741	14.0	21.0
2	隋延仿	第四军医大学基础部病理学教研室	88	384	10.0	13.0
3	张秀敏	第四军医大学基础部病理学教研室	53	243	8.0	11.0
4	李增山	第四军医大学基础部病理学教研室	49	273	8.0	14.0
5	陈广生	第四军医大学基础部病理学教研室	46	197	8.0	10.0
6	叶菁	第四军医大学基础部病理学教研室	79	357	10.0	13.0