荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达

• 作者: 丁郁 吴慧清 吴清平 张菊梅 李程思 潘力 罗展浩
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: ATP生物发光 真核表达 荧光素酶 毕赤酵母 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 88-96
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2018.6.013

摘要

萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,FL)是ATP快速检测技术的核心组件,通过荧光强度与ATP浓度的对应关系,在食品行业检测微生物数量发挥着重大作用.本文为实现荧光素酶在重组毕赤酵母GS115中的异源表达,通过从载体pGL2-control中扩增荧光素酶基因luc,克隆到真核表达载体pPIC9K中,线性化后电击转化毕赤酵母GS1l5菌株,筛选阳性重组菌株.在甲醇的诱导下进行酶的表达,对粗酶液进行生物活性发光分析,然后对粗酶进行超滤、阴离子层析和分子筛凝胶层析三步纯化.甲醇诱导表达96 h发现胞外和胞内粗酶液均有相对较高的酶发光活性,酶活分别为1.45×106 RLU/mL和1.58× 109 RLU/mL.SDS-PAGE与Western blot分析重组荧光蛋白大小约为70 ku,最终纯化得到的荧光素酶,其比活为7.0× 108 RLU/mg,纯化倍数达到19.3倍,产量为48 mg/L.以上结果表明,荧光素酶能够在毕赤酵母表达系统获得较好的表达和纯化效果.