重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞及 重组蛋白表达策略的优化

• 作者: 刘在新 刘霞 卢曾军 李文丽 范朋举
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 猪细小病毒 中和表位 杆状病毒载体表达系统 昆虫细胞
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 118-122
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.08.019

摘要

为确定嵌合口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白在昆虫细胞(Sf-9)中的最佳表达条件.通过对比悬浮培养和贴壁培养2种培养条件,探究Sf-9细胞的最佳培养方式;利用血球计数板每隔24 h进行细胞计数,绘制Sf-9细胞生长曲线;将P1代重组病毒传代至P3代,提取重组病毒基因组DNA,进行PCR鉴定,检测插入目的基因的完整性;通过研究感染复数(MOI)和感染时间的关系来摸索重组病毒最佳感染条件,以获得高滴度的重组病毒;利用Western blot检测目的蛋白的表达量并探究重组蛋白的最佳表达条件.结果表明,悬浮培养的Sf-9细胞大小均一、边缘整齐,生长状态良好;PCR鉴定结果表明,插入的FMDV中和表位基因完整,可以进行重组蛋白的表达;Western blot结果显示,重组蛋白同时与FMDV阳性血清和PPV阳性血清产生特异性反应,进一步证明了插入的FMDV中和表位的存在;重组蛋白最佳表达条件是以10个MOI病毒液感染悬浮Sf-9细胞,在72 h时重组蛋白表达量最大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘霞	甘肃农业大学生命科学技术学院	53	163	8.0	11.0
2	李文丽	甘肃农业大学生命科学技术学院	2	1	1.0	1.0