实时荧光PCR检测血小板制品中常见细菌方法的建立

• 作者: 张燕 方建华 李建斌
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血小板 实时荧光PCR 细菌检测
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 842-845
• 页数: 4页
• 分类号: R331.1+43|R446.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2018.08.008

摘要

目的 建立一种快速灵敏便于开展的血小板制品中常见细菌的实时荧光PCR检测方法,并评价其在血小板制品细菌检测中的应用效果.方法 在NCBI中查找血小板中八种常见细菌的特异性基因序列,分别设计出保守区域的引物和探针,将设计好的引物在基因库中进行比对,确认无交叉再进行合成.将合成好的引物和探针通过扩增血小板常见细菌实验,确定最佳引物和探针,同时确定最佳扩增条件,最终建立完整的血小板制品细菌检测的PCR方法.结果 通过多种引物的实验,确定了实验方案,本实验中共有8组特异性引物,最终实现金黄色葡萄球菌可以检到10 CFU/mL,铜绿假单胞菌可以检到10 CFU/mL,蜡状芽孢杆菌可以检到10 CFU/mL,鲍曼不动杆菌可以检到10 CFU/mL,奇异变形杆菌可以检到20 CFU/mL,白色念珠菌可以检到10 CFU/mL,白喉杆菌可以检到30CFU/mL,肺炎克雷伯菌可以检到20 CFU/mL.整个检测过程从血小板制品取样到核酸的提取,再到扩增结束,需要4-5 h.结论 本方法能够快速准确地检测出血小板制品中的常见细菌,但也存在一定的局限性,对于常见菌以外的细菌无法检出,因此,需要加大样本检测量来验证本方法的有效性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方建华		91	379	11.0	15.0
2	李建斌		83	202	7.0	9.0
3	张燕		22	73	5.0	8.0