hβ-NGF基因真核表达载体构建及亚细胞定位

• 作者: 任秀敏 尹兴忠 杨智 桑川 程春凤 赵冬梅
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: hβ-NGF 真核表达 亚细胞定位 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 300-302
• 页数: 3页
• 分类号: Q813.6
• 字数: 1953字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含EGFP标签的人β-神经生长因子(hβ-NGF)的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础.方法 PCR扩增hβ-NGF 基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组(不转染)、空载组(转染pEGFP-N1质粒)和实验组(转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒),后两组采用脂质体法转染,24h后荧 光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位.结果 经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1-hβ-NGF真核表达载体构建成功.与空载 组比较,实验组融合EGFP只少量分布于胞质中(P＜0.05),不存在于细胞核内.生物信息学分析表明,hβ-NGF基因编码长241个氨基酸的肽链,由信号肽、前导肽和功能肽3段构成,含有 2个N-糖基化位点,6个高度保守半胱氨酸残基,可以形成3个二硫键,是可溶、不稳定的分泌型蛋白;亚细胞定位该蛋白主要位于细胞外,部分分布于胞吞内体和高尔基体,以模序二聚体形 式发挥生物学功能.结论 成功构建了有活性的hβ-NGF真核表达载体,观察到融合蛋白在HEK293真核细胞系分泌表达,其亚细胞分布与生物信息学分析一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	桑川	佳木斯大学附属第二医院神经内科	16	6	1.0	1.0
2	尹兴忠	佳木斯大学基础医学院解剖学教研室	37	163	7.0	11.0
3	杨智	佳木斯大学附属第二医院神经内科	17	29	3.0	5.0
4	赵冬梅	佳木斯大学附属第一医院儿科	33	84	5.0	6.0
5	任秀敏	佳木斯大学附属第一医院神经内科	15	18	3.0	3.0
6	程春凤	佳木斯大学附属第二医院神经内科	20	44	4.0	6.0