携带小鼠白介素-4截短型突变体基因的5型腺相关病毒载体的构建及外源蛋白的体外表达

• 作者: 刘艾洁 朱情情 王青青 田丽春 黄光瑞
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 白介素-4 突变体 腺相关病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 211-216
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|Q78|R562.25
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.02.003

摘要

目的:制备携带碳端结构域缺失的小鼠白介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因突变体的5型重组腺相关病毒(recombinant adenoassociated virus,rAAV)并在细胞水平检测其介导的外源蛋白表达情况.方法:通过分子克隆技术构建携带小鼠IL-4碳端22个氨基酸缺失的突变体的表达质粒pSNAV-mIL-4AC22,三质粒共转染法制备重组的5型AAV病毒,体外感染人支气管上皮样细胞系16HBE和BEAS-2B,并通过Western blot和ELISA检测外源蛋白表达.结果:DNA测序表明构建的小鼠IL-4碳端第118位氨基酸位点处截短的突变体基因表达序列正确无误,制备的重组病毒载体rAAV5-mIL-4AC22滴度约为3× 1011 vg/mL.rAAV5-GFP感染16HBE和BEAS-2B细胞后36小时开始可见持续稳定的荧光蛋白表达,重组病毒rAAV5-mIL-4AC22感染16HBE和BEAS-2B细胞后外源蛋白在培养上清中呈分泌型表达.结论:本研究成功构建了携带小鼠IL-4碳端结构域缺失型突变体的AAV表达质粒并制备了重组病毒rAAV5-mIL-4AC22,该病毒可有效转染16HBE和BEAS-2B细胞并介导外源基因分泌表达截短型小鼠IL-4突变体蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王青青		45	128	6.0	9.0
2	黄光瑞		4	0	0.0	0.0
3	田丽春		3	5	1.0	2.0
4	朱情情		1	0	0.0	0.0
5	刘艾洁		1	0	0.0	0.0