黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化

• 作者: 冯超越 冯雨彤 南天豪 朱振洪 陈星辉 陈梦瑶
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜/锌-超氧化物歧化酶 基因克隆 可溶性表达 纯化
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 111-115
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因, 并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定.[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA, 然后设计特异性引物, 通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因.该基因与p GEX2T载体相连后, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 摸索可溶性表达方法.利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白, SOD酶活性测定采用邻苯三酚法.[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因, 编码152个氨基酸.Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点, 为典型的Cu/Zn-SOD酶.目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h.SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD.活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L.[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因, 该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达, 纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱振洪		49	168	7.0	11.0
2	陈梦瑶		1	0	0.0	0.0
3	冯超越		1	0	0.0	0.0
4	南天豪		1	0	0.0	0.0
5	陈星辉		1	0	0.0	0.0
6	冯雨彤		1	0	0.0	0.0