淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MpOBP8的基因克隆及原核表达分析

• 作者: 季香云 张浩 杨安 梅国红 蒋杰贤 陈义娟
• 来源期刊: 应用昆虫学报
• 关键词: 淡足侧沟茧蜂 MpOBP8 气味结合蛋白 优化表达
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 273-282
• 页数: 10页
• 语种: 中文

摘要

[目的]MpOBP8是淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes Szepligeti的气味结合蛋白,对于昆虫感知外界气味物质起着不可替代的作用.本研究旨在通过MpOBP8的克隆及其优化表达,获得可溶性目的蛋白,探索其嗅觉识别的分子机理.[方法]通过半定量PCR对其组织差异表达进行分析;通过双酶切构建融合表达载体pET32a(+)-MpOBP8,在大肠杆菌中对其进行原核表达分析并对其表达条件进行了优化.[结果]克隆得到了淡足侧沟茧蜂MpOBP8基因(GenBank登录号:MG457156),该基因含有459 bp的开放阅读框,编码152个氨基酸,推测分子量为17.57ku,预测PI值为4.78.通过半定量PCR,在触角中检测到MpOBP8的表达,而在头、胸、腹中均未检测出表达.对其原核表达条件的优化显示:最佳诱导温度、诱导时间、诱导时机、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的终浓度分别为25℃、6 h、菌体培养液OD600为0.1-0.3和0.1 mmol·L-1.大多数的靶蛋白能以上清形式表达,并通过纯化和浓缩得到了高浓度的靶蛋白.[结论]该研究克隆了淡足侧沟茧蜂的MpOBP8基因,并对其原核表达条件进行了优化,探明了该蛋白的最优表达条件,大量获得该气味结合蛋白,为后期研究MpOBP8的嗅觉识别分子机理奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季香云	上海市农业科学院生态环境保护研究所	41	280	9.0	13.0
2	蒋杰贤	上海市农业科学院生态环境保护研究所	57	504	13.0	19.0
3	梅国红		13	7	2.0	2.0
4	陈义娟	上海市农业科学院生态环境保护研究所	2	1	1.0	1.0
5	张浩	上海市农业科学院生态环境保护研究所	7	13	2.0	3.0
6	杨安	上海海洋大学水产与生命学院	3	6	2.0	2.0