牛结节性皮肤病病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 侯长军 孟向阁 李应国 李贤良 杨俊 王国民 王昱 聂福平 韩雪清
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛结节性皮肤病病毒野毒株 荧光定量PCR TaqMan-MGB
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 403-409
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0074

摘要

为鉴别牛结节性皮肤病病毒野毒株(wild type lumpy skin disease virus,WT LSDV),本研究根据GenBank中发表的WT LSDV全基因组序列,设计并合成1对特异性引物和MGB探针,优化反应条件,建立了鉴别检测WT LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法.结果 显示,该方法仅对WT LSDV核酸有特异性扩增,对LSDV疫苗株等其他病毒核酸无交叉反应;标准曲线在一定浓度范围内呈现良好的线性关系,标准曲线为y=-3.361 x+ 34.979,R2＞0.999,扩增效率为98.39％,最低检测限为4.6 copies/μL.组内、组间重复性试验的变异系数均小于3％.对63份模拟临床样品的检测结果显示,本研究建立荧光定量PCR方法的阳性检出率为90.57％,OIE推荐的普通PCR方法的阳性检出率为64.15％,两种方法检测临床样品均为WT LSDV核酸阴性.结果 表明,建立的WT LSDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速、重复性好,且能快速准确地检测WT LSDV,适用于临床样品的鉴别检测,为该病的鉴别、监测、防控提供了技术支撑.