利用CRISPR/Cas9系统建立内生链霉菌SAT1的基因簇敲除体系

• 作者: 孙靖雅 王莎 田文佳 窦桂铭 马玉超
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 pCRISPomyces-2 内生链霉菌SAT1 接合 基因簇敲除
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-1080

摘要

hyBl(hygB-like)基因簇是内生链霉菌SAT1中的次级代谢基因簇,经分析它与潮霉素B基因簇具有52％ 的相似性,可能在SAT1抑制栗疫菌(Cryphonectria parasitica)的过程中发挥主要作用.为了深入研究该菌的抑菌机制和hyBl基因簇的功能,以hyBl为目标,利用CRISPR/Cas9技术建立SAT1的基因簇敲除体系.在实验过程中,通过protospacer的筛选、敲除载体的构建、接合转移供体菌、Ca2+和Mg2+的选择以及接合时间等多个条件的探索,建立了SAT1的基因簇敲除体系.最终以E.coli ET12567(pUZ8002/pCRISPomyces2-CB)为供体菌,在MS培养基(含10 mmol Mg2+)上接合16-18 h,成功获得突变株SAT1△hyBl(缺失14 kb的hyBl基因簇).突变株对栗疫菌的抑制带宽较野生株降低了77％,这说明该基因簇指导合成的次级代谢产物在抑制栗疫菌方面具有重要的功能.本研究证明了利用CRISPR/Cas9系统可以对内生链霉菌SAT1进行基因簇编辑,也为深入研究该菌的抑菌机制、基因工程法验证未知基因簇功能提供了良好的技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马玉超	北京林业大学生物科学与技术学院	16	125	5.0	11.0
2	王莎	北京林业大学生物科学与技术学院	7	30	4.0	5.0
3	窦桂铭	北京林业大学林学院	4	13	3.0	3.0
4	田文佳	北京林业大学生物科学与技术学院	2	0	0.0	0.0
5	孙靖雅	北京林业大学生物科学与技术学院	1	0	0.0	0.0