家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定

• 作者: 仇汝龙 宋艳华 徐为中 朱伟峰 王芳 胡波 范志宇 陈萌萌 魏后军
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家兔 兔出血症病毒 IFN-β基因 启动子 荧光素酶 转录调控
• 年，卷（期）: 2019,（23）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 78-81
• 页数: 4页
• 分类号: S858.291
• 字数: 3433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.23.018

摘要

通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低.为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550 bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性.结果 显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具.