盘尾丝虫ASP1蛋白佐剂活性区不同标签融合表达与佐剂活性比较

• 作者: 卢会鹏 夏晓莉 孙怀昌 张晓凯 张鑫宇 李洋洋 胡威
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 盘尾丝虫活化相关分泌蛋白1 PR-1佐剂活性区 融合标签 佐剂
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 44-50
• 页数: 7页
• 分类号: S852.731
• 字数: 4988字
• 语种: 中文

摘要

为了探明纯化标签对盘尾丝虫活化相关分泌蛋白1(activation-associated secreted protein 1,ASP1)佐剂活性的影响,将其佐剂活性区PR-1编码序列分别与类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptide,ELP)、ELK16自聚肽或His标签进行融合表达,用相变循环、离心洗涤和镍亲和层析进行融合蛋白纯化;将ELP与传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因片段进行融合表达,用蛋白酶切除ELP标签后与不同标签融合PR-1免疫小鼠,两次免疫后不同时间采血分离血清,采用ELISA检测VP2特异IgG、IgG1和IgG2c滴度,用试剂盒检测免疫小鼠血清的IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10浓度.结果显示,ELP-PR1、ELK-PR1、His-PR1和ELP-VP2融合蛋白在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化蛋白纯度大于90％;3种标签融合PR-1均能增强免疫小鼠的抗原特异IgG、IgG1和IgG2应答,并能刺激小鼠产生IFN-γ、TNF-α、IL-6或IL-10细胞因子.在3种PR-1融合蛋白中,ELP-PR1的佐剂活性最强,ELK-PR1与不完全弗氏佐剂相当.本研究探索了不同纯化标签对PR-1免疫佐剂活性的影响,为传染性法氏囊病新型亚单位疫苗佐剂研制提供思路.