猪Hsp40基因过表达与干扰重组慢病毒载体的构建

• 作者: 卓严玲 吕其壮 林谦 章烨雯 谭小梅 邓家华
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 Hsp40基因 过表达 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 76-84
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0220

摘要

热休克蛋白40(Hsp40)作为Hsp70蛋白的分子伴侣,在病毒生命周期中扮演重要角色,笔者拟通过慢病毒感染技术分别建立Hsp40基因过表达和沉默的猪肺泡巨噬细胞系,为以后开展猪Hsp40蛋白调控猪圆环病毒2型(PCV2)复制的机制研究提供有效模型.提取猪肺泡巨噬细胞(PAM)的总RNA,反转录成cDNA后用于Hsp40基因编码区的扩增,并将其克隆到慢病毒过表达载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Green-Puro.测序正确后,设计针对Hsp40基因的4条shRNA干扰序列和1条阴性对照序列,并将其分别插入到慢病毒干扰载体pCDH-U6-MCS-EFl-GreenPuro.将上述6个载体分别与3个辅助载体pVSV-G、pRev和pGag/Pol共转染293T细胞进行病毒包装,测定其滴度后用于感染PAM细胞,采用RT-qPCR和Western-blot方法对Hsp40的表达效果进行鉴定.猪Hsp40基因过表达和沉默重组慢病毒的获得为进一步研究Hsp40蛋白对PCV2复制的影响和机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林谦		25	77	4.0	8.0
2	吕其壮		11	13	2.0	3.0
3	章烨雯		9	8	1.0	2.0
4	卓严玲		5	5	2.0	2.0
5	邓家华		3	1	1.0	1.0
6	谭小梅		1	0	0.0	0.0