CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因及表型分析

• 作者: 李帅庭 梁森 袁志 黄慧哲
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 lkb1 斑马鱼
• 年，卷（期）: 2019,（15）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1445-1452
• 页数: 8页
• 分类号: Q959.466|R394-33|R394.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.201902114

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因,观察和验证纯合子表型,初步探讨Lkb1对肾小管发育的影响.方法 针对斑马鱼lkb1基因设计并体外合成gRNA,通过显微注射技术将gRNA和Cas9 mRNA注入野生型胚胎一细胞期卵黄中,利用T7E1酶切和测序筛选出高效gRNA,通过测序筛选出F0代突变体及可遗传突变体,野生鱼和可遗传突变体鱼杂交产生F1代杂合子突变体,测序鉴定F1代杂合子突变类型,通过F1代杂合子自交产生F2代纯合子幼鱼,通过观察鉴定出纯合子表型;通过RT-PCR和免疫印迹验证纯合子表型.结果 制备了斑马鱼lkb1 gRNA和Cas9 mRNA,筛选出3种产生移码突变的杂合子,发现斑马鱼lkb1基因敲除纯合子幼鱼受精后第5天游动时头尾剧烈摆动,异常兴奋,鱼鳔缺失,体轴弯曲,卵黄消耗过快,肝脏暗淡,肠道水肿;第9天大多数死亡;纯合子g6pase、pdk2b、pcpck1 mRNA显著升高,Lkb1完全不表达;肾小管标志蛋白mRNA显著升高.结论 利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼lkb1基因产生了多种表现,包括肝脏衰竭、肠道水肿、体轴弯曲、鱼鳔缺失、早期致死的表型,同时表明Lkb1对斑马鱼肾小管发育有影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁森	重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	2	3	1.0	1.0
2	李帅庭	重庆医科大学基础医学院发育生物学研究室	1	0	0.0	0.0
3	袁志	重庆医科大学基础医学院发育生物学研究室	3	3	1.0	1.0
4	黄慧哲	重庆医科大学基础医学院发育生物学研究室	7	10	2.0	3.0