AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达

• 作者: 刘微 刘晴 姜琳 孙美艳 张磊 李淼 李艳 许会静 郭健 闫冰
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 视神经脊髓炎 水通道蛋白4 真核表达载体 基因转染 仓鼠
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1193-1198,封2
• 页数: 7页
• 分类号: Q71
• 字数: 3943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190601

摘要

目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达.方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒.采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞).利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性.结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P＜0.05).结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白.