去泛素化酶USP10RNAi慢病毒载体的构建及其对PC12细胞增殖的影响

• 作者: 古丽娟 叶樱泽 张旭 曾智
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 去泛素化酶(USP10) 慢病毒载体 核糖核酸干扰(RNAi) PC12细胞
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 6-10,16
• 页数: 6页
• 分类号: Q591.2|R730.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2018.0855

摘要

目的:构建大鼠去泛素化酶USP10 siRNA重组慢病毒载体,为探讨USP10对神经元的调控作用提供体外模型.方法:设计并合成3对特异性大鼠USP10基因的RNAi靶序列,聚合酶链反应(PCR)扩增后,用AgeⅠ及EcoR Ⅰ双酶切及连接酶构建线性化的GV208慢病毒载体;转化感受态细胞,经Amp抗性筛选阳性克隆,PCR鉴定阳性克隆载体并测序;病毒包装并转染至293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,荧光法检测滴度.用重组慢病毒感染PC12细胞,Westem Blot检测USP10蛋白的表达,CCK-8法检测PC12细胞增殖.结果:经测序鉴定成功构建了3对USP10 RNAi慢病毒载体,感染PC12细胞后,USP10蛋白的表达显著被抑制,PC12细胞的增殖能力明显减弱.结论:成功构建能高效、稳定抑制USP10表达的PC12细胞株,并明显抑制PC12细胞增殖能力,为探讨USP10对神经元的调控作用提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张旭	武汉大学人民医院中心实验室	42	400	8.0	19.0
2	曾智	武汉大学人民医院病理科	34	51	4.0	6.0
3	古丽娟	武汉大学人民医院中心实验室	5	6	2.0	2.0
4	叶樱泽	武汉大学人民医院中心实验室	3	6	2.0	2.0